Salamat sa pagbisita sa nature.com. Limitado ang suporta sa CSS sa bersyon ng browser na iyong ginagamit. Para sa pinakamahusay na karanasan, inirerekomenda namin ang paggamit ng pinakabagong bersyon ng browser (o pag-off ng compatibility mode sa Internet Explorer). Bukod pa rito, upang matiyak ang patuloy na suporta, hindi isasama ng site na ito ang mga estilo o JavaScript.
Ang melamine ay isang kinikilalang kontaminante sa pagkain na maaaring naroroon sa ilang kategorya ng pagkain nang hindi sinasadya at sinasadya. Ang layunin ng pag-aaral na ito ay upang beripikahin ang pagtuklas at pagkuwantipika ng melamine sa formula ng sanggol at milk powder. Isang kabuuang 40 na komersyal na makukuhang sample ng pagkain, kabilang ang formula ng sanggol at milk powder, mula sa iba't ibang rehiyon ng Iran ang sinuri. Ang tinatayang nilalaman ng melamine ng mga sample ay natukoy gamit ang isang high-performance liquid chromatography-ultraviolet (HPLC-UV) system. Isang calibration curve (R2 = 0.9925) ang binuo para sa pagtuklas ng melamine sa hanay na 0.1–1.2 μg mL−1. Ang mga limitasyon ng pagkuwantipika at pagtuklas ay 1 μg mL−1 at 3 μg mL−1, ayon sa pagkakabanggit. Sinubukan ang melamine sa formula ng sanggol at milk powder at ang mga resulta ay nagpakita na ang mga antas ng melamine sa mga sample ng formula ng sanggol at milk powder ay 0.001–0.095 mg kg−1 at 0.001–0.004 mg kg−1, ayon sa pagkakabanggit. Ang mga pagpapahalagang ito ay naaayon sa batas ng EU at sa Codex Alimentarius. Mahalagang tandaan na ang pagkonsumo ng mga produktong gatas na may mababang nilalaman ng melamine ay hindi nagdudulot ng malaking panganib sa kalusugan ng mga mamimili. Sinusuportahan din ito ng mga resulta ng pagtatasa ng panganib.
Ang Melamine ay isang organikong compound na may molecular formula na C3H6N6, na nagmula sa cyanamide. Ito ay may napakababang solubility sa tubig at humigit-kumulang 66% nitrogen. Ang Melamine ay isang malawakang ginagamit na industrial compound na may malawak na hanay ng mga lehitimong gamit sa produksyon ng mga plastik, pataba, at kagamitan sa pagproseso ng pagkain (kabilang ang packaging ng pagkain at mga kagamitan sa kusina)1,2. Ang Melamine ay ginagamit din bilang isang drug carrier para sa paggamot ng mga sakit. Ang mataas na proporsyon ng nitrogen sa melamine ay maaaring humantong sa maling paggamit ng compound at pagbibigay ng mga katangian ng mga molekula ng protina sa mga sangkap ng pagkain3,4. Samakatuwid, ang pagdaragdag ng melamine sa mga produktong pagkain, kabilang ang mga produktong gawa sa gatas, ay nagpapataas ng nilalaman ng nitrogen. Kaya, maling napagpasyahan na ang nilalaman ng protina ng gatas ay mas mataas kaysa sa aktwal na nilalaman nito.
Para sa bawat gramo ng melamine na idinagdag, ang nilalaman ng protina sa pagkain ay tataas ng 0.4%. Gayunpaman, ang melamine ay lubos na natutunaw sa tubig at maaaring magdulot ng mas malubhang pinsala. Ang pagdaragdag ng 1.3 gramo ng melamine sa mga likidong produkto tulad ng gatas ay maaaring magpataas ng nilalaman ng protina ng gatas ng 30%5,6. Bagama't ang melamine ay idinaragdag sa mga pagkain ng hayop at maging sa mga pagkain ng tao upang mapataas ang nilalaman ng protina7, ang Codex Alimentarius Commission (CAC) at mga pambansang awtoridad ay hindi inaprubahan ang melamine bilang isang food additive at inilista ito bilang mapanganib kung malunok, malanghap, o masipsip sa pamamagitan ng balat. Noong 2012, inilista ng International Agency for Research on Cancer ng World Health Organization (WHO) ang melamine bilang isang Class 2B carcinogen dahil maaaring makasama ito sa kalusugan ng tao8. Ang pangmatagalang pagkakalantad sa melamine ay maaaring magdulot ng kanser o pinsala sa bato2. Ang melamine sa pagkain ay maaaring mag-complex sa cyanuric acid upang bumuo ng mga water-insoluble na dilaw na kristal na maaaring magdulot ng pinsala sa tisyu ng bato at pantog, pati na rin ang kanser sa urinary tract at pagbaba ng timbang9,10. Maaari itong magdulot ng matinding pagkalason sa pagkain at, sa mataas na konsentrasyon, kamatayan, lalo na sa mga sanggol at maliliit na bata.11 Itinakda rin ng World Health Organization (WHO) ang tolerable daily intake (TDI) ng melamine para sa mga tao sa 0.2 mg/kg body weight kada araw batay sa mga alituntunin ng CAC.12 Itinakda ng US Food and Drug Administration (US FDA) ang pinakamataas na antas ng residue para sa melamine sa 1 mg/kg sa infant formula at 2.5 mg/kg sa iba pang mga pagkain.2,7 Noong Setyembre 2008, naiulat na ilang lokal na tagagawa ng infant formula ang nagdagdag ng melamine sa milk powder upang mapataas ang nilalaman ng protina ng kanilang mga produkto, na nagresulta sa pagkalason sa milk powder at nagdulot ng insidente ng pagkalason sa melamine sa buong bansa na nagkasakit sa mahigit 294,000 bata at naospital ang mahigit 50,000. 13
Hindi laging posible ang pagpapasuso dahil sa iba't ibang salik tulad ng mga kahirapan sa buhay sa lungsod, pagkakasakit ng ina o anak, na humahantong sa paggamit ng formula ng sanggol sa pagpapakain sa mga sanggol. Dahil dito, may mga pabrika na itinatag upang makagawa ng formula ng sanggol na halos kapareho ng komposisyon ng gatas ng ina14. Ang formula ng sanggol na ibinebenta sa merkado ay karaniwang gawa sa gatas ng baka at kadalasang gawa sa espesyal na halo ng mga taba, protina, carbohydrates, bitamina, mineral at iba pang mga compound. Upang maging malapit sa gatas ng ina, ang nilalaman ng protina at taba ng formula ay nag-iiba, at depende sa uri ng gatas, pinapalakas ang mga ito ng mga compound tulad ng mga bitamina at mineral tulad ng iron15. Dahil ang mga sanggol ay isang sensitibong grupo at may panganib ng pagkalason, ang kaligtasan ng pagkonsumo ng milk powder ay napakahalaga sa kalusugan. Matapos ang kaso ng pagkalason sa melamine sa mga sanggol na Tsino, binigyang-pansin ng mga bansa sa buong mundo ang isyung ito, at tumaas din ang sensitibidad ng lugar na ito. Samakatuwid, lalong mahalaga na palakasin ang kontrol sa produksyon ng formula ng sanggol upang protektahan ang kalusugan ng mga sanggol. Mayroong iba't ibang mga pamamaraan para sa pagtukoy ng melamine sa pagkain, kabilang ang high-performance liquid chromatography (HPLC), electrophoresis, sensory method, spectrophotometry at antigen-antibody enzyme-linked immunosorbent assay16. Noong 2007, ang US Food and Drug Administration (FDA) ay bumuo at naglathala ng isang pamamaraan ng HPLC para sa pagtukoy ng melamine at cyanuric acid sa pagkain, na siyang pinakaepektibong pamamaraan para sa pagtukoy ng nilalaman ng melamine17.
Ang konsentrasyon ng melamine sa formula ng sanggol na sinukat gamit ang isang bagong pamamaraan ng infrared spectroscopy ay mula 0.33 hanggang 0.96 milligrams bawat kilo (mg kg-1). 18 Natuklasan sa isang pag-aaral sa Sri Lanka na ang antas ng melamine sa whole milk powder ay mula 0.39 hanggang 0.84 mg kg-1. Bukod pa rito, ang mga imported na sample ng formula ng sanggol ay naglalaman ng pinakamataas na antas ng melamine, sa 0.96 at 0.94 mg/kg, ayon sa pagkakabanggit. Ang mga antas na ito ay mas mababa sa limitasyon ng regulasyon (1 mg/kg), ngunit kinakailangan ang isang programa sa pagsubaybay para sa kaligtasan ng mga mamimili. 19
Sinuri ng ilang pag-aaral ang mga antas ng melamine sa mga formula ng sanggol sa Iran. Humigit-kumulang 65% ng mga sample ang naglalaman ng melamine, na may average na 0.73 mg/kg at maximum na 3.63 mg/kg. Iniulat ng isa pang pag-aaral na ang antas ng melamine sa formula ng sanggol ay mula 0.35 hanggang 3.40 μg/kg, na may average na 1.38 μg/kg. Sa pangkalahatan, ang presensya at antas ng melamine sa mga formula ng sanggol sa Iran ay nasuri na sa iba't ibang pag-aaral, kung saan ang ilang mga sample na naglalaman ng melamine ay lumampas sa maximum na limitasyon na itinakda ng mga awtoridad sa regulasyon (2.5 mg/kg/feed).
Kung isasaalang-alang ang malawakang direkta at hindi direktang pagkonsumo ng milk powder sa industriya ng pagkain at ang espesyal na kahalagahan ng infant formula sa pagpapakain sa mga bata, nilalayon ng pag-aaral na ito na patunayan ang paraan ng pagtukoy ng melamine sa milk powder at infant formula. Sa katunayan, ang unang layunin ng pag-aaral na ito ay ang bumuo ng isang mabilis, simple, at tumpak na quantitative na paraan para sa pagtukoy ng melamine adulteration sa infant formula at milk powder gamit ang high performance liquid chromatography (HPLC) at ultraviolet (UV) detection; Pangalawa, ang layunin ng pag-aaral na ito ay upang matukoy ang nilalaman ng melamine sa infant formula at milk powder na ibinebenta sa merkado ng Iran.
Ang mga instrumentong ginagamit para sa pagsusuri ng melamine ay nag-iiba depende sa lokasyon ng produksyon ng pagkain. Isang sensitibo at maaasahang paraan ng pagsusuri ng HPLC-UV ang ginamit upang sukatin ang mga residue ng melamine sa gatas at formula ng sanggol. Ang mga produktong gawa sa gatas ay naglalaman ng iba't ibang protina at taba na maaaring makagambala sa pagsukat ng melamine. Samakatuwid, gaya ng nabanggit nina Sun et al. 22, kinakailangan ang isang naaangkop at epektibong estratehiya sa paglilinis bago ang instrumental na pagsusuri. Sa pag-aaral na ito, gumamit kami ng mga disposable syringe filter. Sa pag-aaral na ito, gumamit kami ng C18 column upang paghiwalayin ang melamine sa formula ng sanggol at milk powder. Ipinapakita ng Figure 1 ang chromatogram para sa pagtuklas ng melamine. Bukod pa rito, ang pagbawi ng mga sample na naglalaman ng 0.1–1.2 mg/kg melamine ay mula 95% hanggang 109%, ang regression equation ay y = 1.2487x − 0.005 (r = 0.9925), at ang mga relatibong standard deviation (RSD) na halaga ay mula 0.8 hanggang 2%. Ang magagamit na datos ay nagpapahiwatig na ang pamamaraan ay maaasahan sa pinag-aralang hanay ng konsentrasyon (Talahanayan 1). Ang instrumental na limitasyon ng pagtuklas (LOD) at limitasyon ng dami (LOQ) ng melamine ay 1 μg mL−1 at 3 μg mL−1, ayon sa pagkakabanggit. Bukod pa rito, ang UV spectrum ng melamine ay nagpakita ng absorption band sa 242 nm. Ang paraan ng pagtuklas ay sensitibo, maaasahan, at tumpak. Ang pamamaraang ito ay maaaring gamitin para sa regular na pagtukoy ng antas ng melamine.
Ang mga katulad na resulta ay nailathala na ng ilang mga may-akda. Isang high-performance liquid chromatography-photodiode array (HPLC) na pamamaraan ang binuo para sa pagsusuri ng melamine sa mga produktong gawa sa gatas. Ang mas mababang limitasyon ng quantification ay 340 μg kg−1 para sa milk powder at 280 μg kg−1 para sa infant formula sa 240 nm. Iniulat nina Filazzi et al. (2012) na ang melamine ay hindi natukoy sa infant formula ng HPLC. Gayunpaman, 8% ng mga sample ng milk powder ay naglalaman ng melamine sa antas na 0.505–0.86 mg/kg. Nagsagawa si Tittlemiet et al.23 ng katulad na pag-aaral at natukoy ang nilalaman ng melamine ng infant formula (sample number: 72) sa pamamagitan ng high-performance liquid chromatography-mass spectrometry/MS (HPLC-MS/MS) na humigit-kumulang 0.0431–0.346 mg kg−1. Sa isang pag-aaral na isinagawa nina Venkatasamy et al. (2010), isang green chemistry approach (walang acetonitrile) at reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) ang ginamit upang tantyahin ang melamine sa formula ng sanggol at gatas. Ang saklaw ng konsentrasyon ng sample ay mula 1.0 hanggang 80 g/mL at ang tugon ay linear (r > 0.999). Ang pamamaraan ay nagpakita ng mga recoveries na 97.2–101.2 sa hanay ng konsentrasyon na 5–40 g/mL at ang reproducibility ay mas mababa sa 1.0% relative standard deviation. Bukod dito, ang naobserbahang LOD at LOQ ay 0.1 g mL−1 at 0.2 g mL−124, ayon sa pagkakabanggit. Tinukoy nina Lutter et al. (2011) ang kontaminasyon ng melamine sa gatas ng baka at formula ng sanggol na nakabase sa gatas gamit ang HPLC-UV. Ang mga konsentrasyon ng melamine ay mula < 0.2 hanggang 2.52 mg kg−1. Ang linear dynamic range ng HPLC-UV method ay 0.05 hanggang 2.5 mg kg−1 para sa gatas ng baka, 0.13 hanggang 6.25 mg kg−1 para sa infant formula na may protein mass fraction na <15%, at 0.25 hanggang 12.5 mg kg−1 para sa infant formula na may protein mass fraction na 15%. Ang mga resulta ng LOD (at LOQ) ay 0.03 mg kg−1 (0.09 mg kg−1) para sa gatas ng baka, 0.06 mg kg−1 (0.18 mg kg−1) para sa infant formula na <15% protein, at 0.12 mg kg−1 (0.36 mg kg−1) para sa infant formula na 15% protein, na may signal-to-noise ratio na 3 at 1025 para sa LOD at LOQ, ayon sa pagkakabanggit. Sinuri nina Diebes et al. (2012) ang mga antas ng melamine sa mga sample ng infant formula at milk powder gamit ang HPLC/DMD. Sa pormulang pangsanggol, ang pinakamababa at pinakamataas na antas ay 9.49 mg kg−1 at 258 mg kg−1, ayon sa pagkakabanggit. Ang limitasyon ng pagtuklas (LOD) ay 0.05 mg kg−1.
Iniulat nina Javaid et al. na ang mga residue ng melamine sa formula ng sanggol ay nasa hanay na 0.002–2 mg kg−1 gamit ang Fourier transform infrared spectroscopy (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3.5 mg kg−1). Iminungkahi nina Rezai et al.27 ang isang pamamaraan ng HPLC-DDA (λ = 220 nm) upang tantyahin ang melamine at nakamit ang LOQ na 0.08 μg mL−1 para sa milk powder, na mas mababa kaysa sa antas na nakuha sa pag-aaral na ito. Bumuo si Sun et al. ng isang RP-HPLC-DAD para sa pagtuklas ng melamine sa likidong gatas sa pamamagitan ng solid phase extraction (SPE). Nakakuha sila ng LOD at LOQ na 18 at 60 μg kg−128, ayon sa pagkakabanggit, na mas sensitibo kaysa sa kasalukuyang pag-aaral. Si Montesano et al. kinumpirma ang bisa ng pamamaraan ng HPLC-DMD para sa pagtatasa ng nilalaman ng melamine sa mga suplemento ng protina na may limitasyon ng dami na 0.05–3 mg/kg, na hindi gaanong sensitibo kaysa sa pamamaraang ginamit sa pag-aaral na ito29.
Walang alinlangan, ang mga analytical laboratory ay may mahalagang papel sa pagprotekta sa kapaligiran sa pamamagitan ng pagsubaybay sa mga pollutant sa iba't ibang sample. Gayunpaman, ang paggamit ng maraming reagent at solvent habang sinusuri ay maaaring magresulta sa pagbuo ng mga mapanganib na residue. Samakatuwid, ang green analytical chemistry (GAC) ay binuo noong 2000 upang mabawasan o maalis ang masamang epekto ng mga analytical procedure sa mga operator at sa kapaligiran26. Ang mga tradisyonal na pamamaraan ng pagtukoy ng melamine kabilang ang chromatography, electrophoresis, capillary electrophoresis, at enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ay ginamit upang matukoy ang melamine. Gayunpaman, sa maraming pamamaraan ng pagtukoy, ang mga electrochemical sensor ay nakakuha ng maraming atensyon dahil sa kanilang mahusay na sensitivity, selectivity, mabilis na oras ng pagsusuri, at mga katangiang madaling gamitin30,31. Gumagamit ang green nanotechnology ng mga biological pathway upang mag-synthesize ng mga nanomaterial, na maaaring mabawasan ang pagbuo ng mapanganib na basura at pagkonsumo ng enerhiya, sa gayon ay nagtataguyod ng pagpapatupad ng mga napapanatiling kasanayan. Ang mga nanocomposites, halimbawa, na gawa sa mga materyales na environment-friendly, ay maaaring gamitin sa mga biosensor upang matukoy ang mga sangkap tulad ng melamine32,33,34.
Ipinapakita ng pag-aaral na ang solid-phase microextraction (SPME) ay epektibong ginagamit dahil sa mas mataas na kahusayan sa enerhiya at pagpapanatili nito kumpara sa mga tradisyonal na pamamaraan ng pagkuha. Ang pagiging environment-friendly at kahusayan sa enerhiya ng SPME ay ginagawa itong isang mahusay na alternatibo sa mga tradisyonal na pamamaraan ng pagkuha sa analytical chemistry at nagbibigay ng mas napapanatiling at mahusay na pamamaraan para sa paghahanda ng sample35.
Noong 2013, bumuo sina Wu et al. ng isang lubos na sensitibo at selective surface plasmon resonance (mini-SPR) biosensor na gumagamit ng coupling sa pagitan ng melamine at anti-melamine antibodies upang mabilis na matukoy ang melamine sa infant formula gamit ang isang immunoassay. Ang SPR biosensor na sinamahan ng isang immunoassay (gamit ang melamine-conjugated bovine serum albumin) ay isang madaling gamitin at murang teknolohiya na may limitasyon sa pagtuklas na 0.02 μg mL-136 lamang.
Gumamit sina Nasiri at Abbasian ng isang high-potential portable sensor kasama ng graphene oxide-chitosan composites (GOCS) upang matukoy ang melamine sa mga komersyal na sample37. Ang pamamaraang ito ay nagpakita ng napakataas na selectivity, accuracy, at response. Ang GOCS sensor ay nagpakita ng kahanga-hangang sensitivity (239.1 μM−1), isang linear range na 0.01 hanggang 200 μM, isang affinity constant na 1.73 × 104, at isang LOD na hanggang 10 nM. Bukod dito, isang pag-aaral na isinagawa nina Chandrasekhar et al. noong 2024 ang nagpatibay ng isang eco-friendly at cost-effective na diskarte. Gumamit sila ng papaya peel extract bilang isang reducing agent upang i-synthesize ang zinc oxide nanoparticles (ZnO-NPs) sa isang eco-friendly na pamamaraan. Kasunod nito, isang natatanging micro-Raman spectroscopy technique ang binuo para sa pagtukoy ng melamine sa infant formula. Ang mga ZnO-NP na nagmula sa basura ng agrikultura ay nagpakita ng potensyal bilang isang mahalagang diagnostic tool at isang maaasahan at murang teknolohiya para sa pagsubaybay at pagtuklas ng melamine38.
Gumamit sina Alizadeh et al. (2024) ng isang highly sensitive metal-organic framework (MOF) fluorescence platform upang matukoy ang melamine sa milk powder. Ang linear range at lower detection limit ng sensor, na tinukoy gamit ang 3σ/S, ay 40 hanggang 396.45 nM (katumbas ng 25 μg kg−1 hanggang 0.25 mg kg−1) at 40 nM (katumbas ng 25 μg kg−1), ayon sa pagkakabanggit. Ang saklaw na ito ay mas mababa sa maximum residue levels (MRLs) na itinakda para sa pagtukoy ng melamine sa infant formula (1 mg kg−1) at iba pang food/feed samples (2.5 mg kg−1). Ang fluorescent sensor (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) ay nagpakita ng mas mataas na katumpakan at mas tumpak na kakayahan sa pagsukat kaysa sa HPLC39 sa pagtukoy ng melamine sa milk powder. Ang mga biosensor at nanocomposites sa green chemistry ay hindi lamang nagpapahusay sa mga kakayahan sa pagtukoy kundi binabawasan din ang mga panganib sa kapaligiran alinsunod sa mga prinsipyo ng sustainable development.
Ang mga prinsipyo ng berdeng kimika ay inilapat sa iba't ibang pamamaraan para sa pagtukoy ng melamine. Ang isang pamamaraan ay ang pagbuo ng isang berdeng dispersive solid-phase microextraction method gamit ang natural polar polymer β-cyclodextrin cross-linked with citric acid para sa mahusay na pagkuha ng melamine 40 mula sa mga sample tulad ng infant formula at mainit na tubig. Ang isa pang pamamaraan ay gumagamit ng Mannich reaction para sa pagtukoy ng melamine sa mga sample ng gatas. Ang pamamaraang ito ay mura, environment-friendly, at lubos na tumpak na may linear range na 0.1–2.5 ppm at mababang detection limit 41. Bukod pa rito, isang cost-effective at environment-friendly na pamamaraan para sa quantitative determination ng melamine sa liquid milk at infant formula ang binuo gamit ang Fourier transform infrared transmission spectroscopy na may mataas na katumpakan at detection limit na 1 ppm at 3.5 ppm, ayon sa pagkakabanggit 42. Ipinapakita ng mga pamamaraang ito ang aplikasyon ng mga prinsipyo ng berdeng kimika sa pagbuo ng mahusay at napapanatiling mga pamamaraan para sa pagtukoy ng melamine.
Ilang pag-aaral ang nagpanukala ng mga makabagong pamamaraan para sa pagtuklas ng melamine, tulad ng paggamit ng solid-phase extraction at high-performance liquid chromatography (HPLC)43, pati na rin ang mabilis na high-performance liquid chromatography (HPLC), na hindi nangangailangan ng kumplikadong pre-treatment o ion-pair reagents, sa gayon ay binabawasan ang dami ng basurang kemikal44. Ang mga pamamaraang ito ay hindi lamang nagbibigay ng tumpak na mga resulta para sa pagtukoy ng melamine sa mga produktong gawa sa gatas, kundi sumusunod din sa mga prinsipyo ng green chemistry, na binabawasan ang paggamit ng mga mapanganib na kemikal at binabawasan ang pangkalahatang epekto sa kapaligiran ng proseso ng pagsusuri.
Apatnapung sample ng iba't ibang brand ang sinubukan nang tatlong beses, at ang mga resulta ay makikita sa Table 2. Ang mga antas ng melamine sa mga sample ng formula ng sanggol at milk powder ay mula 0.001 hanggang 0.004 mg/kg at mula 0.001 hanggang 0.095 mg/kg, ayon sa pagkakabanggit. Walang naobserbahang makabuluhang pagbabago sa pagitan ng tatlong pangkat ng edad ng formula ng sanggol. Bukod pa rito, ang melamine ay nakita sa 80% ng milk powder, ngunit 65% ng mga formula ng sanggol ay kontaminado ng melamine.
Mas mataas ang nilalaman ng melamine sa industrial milk powder kaysa sa infant formula, at makabuluhan ang pagkakaiba (p<0.05) (Figure 2).
Ang mga resultang nakuha ay mas mababa sa mga limitasyong itinakda ng FDA (mas mababa sa 1 at 2.5 mg/kg). Bukod pa rito, ang mga resulta ay naaayon sa mga limitasyong itinakda ng CAC (2010) at ng EU45,46, ibig sabihin, ang pinakamataas na pinahihintulutang limitasyon ay 1 mg kg-1 para sa formula ng sanggol at 2.5 mg kg-1 para sa mga produktong gawa sa gatas.
Ayon sa isang pag-aaral noong 2023 ni Ghanati et al.47, ang nilalaman ng melamine sa iba't ibang uri ng nakabalot na gatas sa Iran ay mula 50.7 hanggang 790 μg kg−1. Ang kanilang mga resulta ay mas mababa sa pinapayagang limitasyon ng FDA. Ang aming mga resulta ay mas mababa kaysa sa kina Shoder et al.48 at Rima et al.49. Natuklasan ni Shoder et al. (2010) na ang mga antas ng melamine sa milk powder (n=49) na tinukoy ng ELISA ay mula 0.5 hanggang 5.5 mg/kg. Sinuri nina Rima et al. ang mga residue ng melamine sa milk powder sa pamamagitan ng fluorescence spectrophotometry at natuklasan na ang nilalaman ng melamine sa milk powder ay 0.72–5.76 mg/kg. Isang pag-aaral ang isinagawa sa Canada noong 2011 upang subaybayan ang mga antas ng melamine sa formula ng sanggol (n=94) gamit ang liquid chromatography (LC/MS). Ang mga konsentrasyon ng melamine ay natagpuang mas mababa sa katanggap-tanggap na limitasyon (paunang pamantayan: 0.5 mg kg−1). Malamang na ang mga mapanlinlang na antas ng melamine na natukoy ay isang taktika na ginamit upang mapataas ang nilalaman ng protina. Gayunpaman, hindi ito maipaliwanag sa pamamagitan ng paggamit ng mga pataba, paglilipat ng mga laman ng lalagyan, o mga katulad na salik. Bukod pa rito, hindi isiniwalat ang pinagmulan ng melamine sa milk powder na inangkat sa Canada50.
Sinukat nina Hassani et al. ang nilalaman ng melamine sa milk powder at liquid milk sa merkado ng Iran noong 2013 at nakahanap ng mga katulad na resulta. Ipinakita ng mga resulta na maliban sa isang brand ng milk powder at liquid milk, lahat ng iba pang sample ay kontaminado ng melamine, na may mga antas mula 1.50 hanggang 30.32 μg g−1 sa milk powder at 0.11 hanggang 1.48 μg ml−1 sa gatas. Kapansin-pansin, ang cyanuric acid ay hindi nakita sa alinman sa mga sample, na nagbawas sa posibilidad ng pagkalason sa melamine para sa mga mamimili. 51 Sinuri ng mga nakaraang pag-aaral ang konsentrasyon ng melamine sa mga produktong tsokolate na naglalaman ng milk powder. Humigit-kumulang 94% ng mga imported na sample at 77% ng mga sample ng Iran ay naglalaman ng melamine. Ang mga antas ng melamine sa mga imported na sample ay mula 0.032 hanggang 2.692 mg/kg, habang ang mga nasa mga sample ng Iran ay mula 0.013 hanggang 2.600 mg/kg. Sa pangkalahatan, ang melamine ay natukoy sa 85% ng mga sample, ngunit isa lamang partikular na brand ang may mga antas na higit sa pinapayagang limitasyon.44 Iniulat nina Tittlemier et al. ang mga antas ng melamine sa milk powder mula 0.00528 hanggang 0.0122 mg/kg.
Ibinubuod ng Talahanayan 3 ang mga resulta ng pagtatasa ng panganib para sa tatlong pangkat ng edad. Ang panganib ay mas mababa sa 1 sa lahat ng pangkat ng edad. Kaya, walang panganib sa kalusugan na hindi nagdudulot ng kanser mula sa melamine sa formula ng sanggol.
Ang mas mababang antas ng kontaminasyon sa mga produktong gawa sa gatas ay maaaring dahil sa hindi sinasadyang kontaminasyon habang inihahanda, habang ang mas mataas na antas ay maaaring dahil sa sinasadyang pagdaragdag. Bukod pa rito, ang pangkalahatang panganib sa kalusugan ng tao mula sa pagkonsumo ng mga produktong gawa sa gatas na may mababang antas ng melamine ay itinuturing na mababa. Maaaring mahinuha na ang pagkonsumo ng mga produktong naglalaman ng ganitong mababang antas ng melamine ay hindi nagdudulot ng anumang panganib sa kalusugan ng mamimili52.
Kung isasaalang-alang ang kahalagahan ng pamamahala sa kaligtasan ng pagkain sa industriya ng pagawaan ng gatas, lalo na sa mga tuntunin ng pagprotekta sa kalusugan ng publiko, napakahalagang bumuo at magpatunay ng isang pamamaraan para sa pagtatasa at paghahambing ng mga antas at residue ng melamine sa milk powder at infant formula. Isang simple at tumpak na pamamaraan ng HPLC-UV spectrophotometric ang binuo para sa pagtukoy ng melamine sa infant formula at milk powder. Ang pamamaraan ay napatunayan upang matiyak ang pagiging maaasahan at katumpakan nito. Ang mga limitasyon sa pagtuklas at pagkuwantipika ng pamamaraan ay ipinakita na sapat na sensitibo upang masukat ang mga antas ng melamine sa infant formula at milk powder. Ayon sa aming datos, ang melamine ay natukoy sa karamihan ng mga sample ng Iran. Ang lahat ng natukoy na antas ng melamine ay mas mababa sa pinakamataas na pinapayagang mga limitasyon na itinakda ng CAC, na nagpapahiwatig na ang pagkonsumo ng mga ganitong uri ng produktong gawa sa gatas ay hindi nagdudulot ng panganib sa kalusugan ng tao.
Lahat ng kemikal na reagent na ginamit ay may analytical grade: melamine (2,4,6-triamino-1,3,5-triazine) 99% puro (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); HPLC-grade acetonitrile (Merck, Darmstadt, Germany); ultrapure na tubig (Millipore, Morfheim, France). Mga disposable syringe filter (Chromafil Xtra PVDF-45/25, pore size 0.45 μm, membrane diameter 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Germany).
Isang ultrasonic bath (Elma, Germany), isang centrifuge (Beckman Coulter, Krefeld, Germany) at HPLC (KNAUER, Germany) ang ginamit upang ihanda ang mga sample.
Isang high performance liquid chromatograph (KNAUER, Germany) na may UV detector ang ginamit. Ang mga kondisyon sa pagsusuri ng HPLC ay ang mga sumusunod: isang UHPLC Ultimate system na may ODS-3 C18 analytical column (4.6 mm × 250 mm, particle size 5 μm) (MZ, Germany) ang ginamit. Ang HPLC eluent (mobile phase) ay isang pinaghalong TFA/methanol (450:50 mL) na may flow rate na 1 mL min-1. Ang detection wavelength ay 242 nm. Ang injection volume ay 100 μL, ang column temperature ay 20 °C. Dahil mahaba ang retention time ng gamot (15 minuto), ang susunod na iniksyon ay dapat gawin pagkatapos ng 25 minuto. Natukoy ang melamine sa pamamagitan ng paghahambing ng retention time at ng UV spectrum peak ng melamine standards.
Isang karaniwang solusyon ng melamine (10 μg/mL) ang inihanda gamit ang tubig at itinago sa isang refrigerator (4 °C) na malayo sa liwanag. Haluan ng palabnawin ang stock solution gamit ang mobile phase at ihanda ang mga working standard solution. Ang bawat karaniwang solusyon ay iniksyon sa HPLC nang 7 beses. Ang calibration equation 10 ay kinalkula sa pamamagitan ng regression analysis ng natukoy na peak area at ang natukoy na konsentrasyon.
Ang mga mabibiling pulbos ng gatas ng baka (20 sample) at mga sample ng iba't ibang brand ng pormulang pangsanggol na gawa sa gatas ng baka (20 sample) ay binili mula sa mga lokal na supermarket at botika sa Iran para sa pagpapakain sa mga sanggol na may iba't ibang pangkat ng edad (0–6 na buwan, 6–12 buwan, at >12 buwan) at iniimbak sa temperaturang naka-refrigerate (4 °C) hanggang sa pagsusuri. Pagkatapos, 1 ± 0.01 g ng homogenized milk powder ang tinimbang at hinaluan ng acetonitrile:tubig (50:50, v/v; 5 mL). Ang timpla ay hinalo sa loob ng 1 minuto, pagkatapos ay nilagyan ng sonication sa isang ultrasonic bath sa loob ng 30 minuto, at sa huli ay inalog sa loob ng 1 minuto. Ang timpla ay isinailalim sa centrifuge sa 9000 × g sa loob ng 10 minuto sa temperatura ng silid at ang supernatant ay sinala sa isang 2 ml autosampler vial gamit ang isang 0.45 μm syringe filter. Ang filtrate (250 μl) ay hinaluan ng tubig (750 μl) at itinurok sa HPLC system10,42.
Upang mapatunayan ang pamamaraan, tinukoy namin ang pagbawi, katumpakan, limitasyon ng pagtuklas (LOD), limitasyon ng dami (LOQ), at katumpakan sa ilalim ng pinakamainam na mga kondisyon. Ang LOD ay tinukoy bilang ang nilalaman ng sample na may pinakamataas na taas na tatlong beses ng baseline noise level. Sa kabilang banda, ang nilalaman ng sample na may pinakamataas na taas na 10 beses ng signal-to-noise ratio ay tinukoy bilang ang LOQ.
Ang tugon ng aparato ay natukoy gamit ang isang calibration curve na binubuo ng pitong data point. Iba't ibang nilalaman ng melamine ang ginamit (0, 0.2, 0.3, 0.5, 0.8, 1 at 1.2). Natukoy ang linearity ng pamamaraan ng pagkalkula ng melamine. Bukod pa rito, maraming iba't ibang antas ng melamine ang idinagdag sa mga blankong sample. Ang calibration curve ay binuo sa pamamagitan ng patuloy na pag-inject ng 0.1–1.2 μg mL−1 ng isang karaniwang solusyon ng melamine sa mga sample ng formula ng sanggol at powdered milk at ang R2 nito ay = 0.9925. Ang katumpakan ay tinasa sa pamamagitan ng repeatability at reproducibility ng pamamaraan at nakamit sa pamamagitan ng pag-inject ng mga sample sa una at tatlong kasunod na araw (nang tatlong beses). Ang repeatability ng pamamaraan ay tinasa sa pamamagitan ng pagkalkula ng RSD % para sa tatlong magkakaibang konsentrasyon ng idinagdag na melamine. Isinagawa ang mga recovery study upang matukoy ang katumpakan. Ang antas ng pagbawi gamit ang paraan ng pagkuha ay kinalkula sa tatlong antas ng konsentrasyon ng melamine (0.1, 1.2, 2) sa mga sample ng formula ng sanggol at tuyong gatas9,11,15.
Ang tinantyang pang-araw-araw na paggamit (EDI) ay natukoy gamit ang sumusunod na pormula: EDI = Ci × Cc/BW.
Kung saan ang Ci ay ang karaniwang nilalaman ng melamine, ang Cc ay ang konsumo ng gatas at ang BW ay ang karaniwang timbang ng mga bata.
Isinagawa ang pagsusuri ng datos gamit ang SPSS 24. Sinubukan ang normalidad gamit ang Kolmogorov-Smirnov test; lahat ng datos ay mga nonparametric test (p = 0). Samakatuwid, ginamit ang Kruskal-Wallis test at ang Mann-Whitney test upang matukoy ang mga makabuluhang pagkakaiba sa pagitan ng mga grupo.
Ingelfinger, Jr. Melamine at ang epekto nito sa pandaigdigang kontaminasyon ng pagkain. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA, et al. Epekto ng pH sa paglipat ng melamine sa mga mangkok ng mga bata. International Journal of Food Contamination, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP at Gilbert, IH Pag-target ng mga nakalalasong compound sa loob ng mga trypanosome. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF, et al. In vitro at in vivo na pagsusuri ng mga melamine dendrimer bilang mga sasakyan sa paghahatid ng gamot. International Journal of Pharmacy, 281(1–2), 129–132(2004).
World Health Organization. Mga Pagpupulong ng mga Dalubhasa 1–4 upang repasuhin ang mga aspeto ng lasonolohiya ng melamine at cyanuric acid (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH at Lee, PK-T. Pagkalason ng melamine at ang bato. Journal of the American Society of Nephrology 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. at Demir, N. Pagbuo ng isang nobelang IMAC adsorbent para sa pagtukoy ng melamine sa mga produktong gawa sa gatas sa pamamagitan ng high performance liquid chromatography (HPLC). Journal of Food Synthesis and Analysis 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. at Imim, A. Simpleng spectrophotometric na pagtukoy ng melamine sa likidong gatas batay sa Mannich green reaction. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. at El-Habib, R. Pagtukoy ng melamine sa pormula ng sanggol, pulbos ng gatas at mga sample ng pangasius sa pamamagitan ng HPLC/diode array chromatography. Journal of Environmental Analytical Toxicology, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD, at Osterloh, JD Pagkalason ng Melamine. Journal of Medical Toxicology, 6, 50–55 (2010).
World Health Organization (WHO), Toxicology at mga aspeto ng kalusugan ng melamine at cyanuric acid: Ulat ng isang pagpupulong ng mga eksperto sa pakikipagtulungan ng WHO/FAO na sinuportahan ng Health Canada, Ottawa, Canada, Disyembre 1-4, 2008 (2009).
Korma, SA, et al. Paghahambing na pag-aaral ng komposisyon ng lipid at kalidad ng pulbos ng formula ng sanggol na naglalaman ng mga nobelang functional structural lipid at komersyal na formula ng sanggol. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. at Hashem, H. Pagpapahusay ng nutritional value, mga katangian ng kalidad at shelf life ng infant formula gamit ang palm oil. Middle East Journal of Agricultural Research 6, 274–281 (2017).
Yin, W., et al. Produksyon ng mga monoclonal antibodies laban sa melamine at pagbuo ng isang hindi direktang mapagkumpitensyang pamamaraan ng ELISA para sa pagtuklas ng melamine sa hilaw na gatas, tuyong gatas, at pagkain ng hayop. Journal of Agricultural and Food Chemistry 58(14), 8152–8157 (2010).